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液相色譜柱怎么裝填和活化?

更新時間:2022-09-23   點擊次數(shù):1167次
  液相色譜柱是由具有光學活性的單體,固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相,通過引入手性環(huán)境使對映異構體間呈現(xiàn)物理特征的差異,從而達到光學異構體拆分的目的。
 
  在手性拆分中,溫度的影響是很顯著的。低溫增加手性識別能力,但可能引起色譜峰變寬而導致分離變差。因此確定手性分析方法過程中要考慮柱溫的影響,確定柱溫。
 
  要實現(xiàn)手性識別,手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結果。
 
  這些相互作用通過影響包埋復合物的形成,特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結果。由于這種作用力較微弱,因此需要仔細調(diào)節(jié)、優(yōu)化流動相和溫度以達到分離效果。
 
  液相色譜柱裝填實際上是有一定技巧和程序,可能還有一些運氣。一般使用高壓勻漿方法裝填。也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實,這實際上用到了不同比例的勻漿液體,和合適的壓力。壓力太大,顆粒破碎,壓力太小,塔板數(shù)少。同時壓力需要穩(wěn)定,不然分布不均,拖尾嚴重。同時還有頭上平整程度。套上套,就可以用了。
 
  新柱活化,實際上是一個平衡的過程,除了用流動相平衡外,有時候還要用所測樣品對新柱進行平衡,特別是測定分子量比較高的多肽,尤其重要。因為分子量高的物質(zhì)分子,擴散速度慢,平衡所需時間也相應較長。具體平衡方式也很簡單,多進幾次樣品,直到峰面積和保留時間穩(wěn)定,再進行正式進樣測定。
 

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